Tái tổ hợp enzym giới hạn mới sử dụng gene tương tự Mae843ORF8180 phân lập từ mẫu nước tự nhiên ở Hà Nội

Tái tổ hợp enzym giới hạn mới sử dụng gene tương tự Mae843ORF8180 phân lập từ mẫu nước tự nhiên ở Hà Nội
Recombination of a novel restriction enzyme using aMAE843ORF8180 – like geneisolated from natural samples
Tác giả: Lê Thị Kim Tuyến, Nguyễn Thị Mai Phương
Tóm tắt:
Các thành viên nhóm enzym giới hạn R-M IIG có đồng thời hai chức năng “cắt giới hạn” và “sửa đổi” trình tự nucleotide. Trong nhóm này có các họ enzym được tìm thấy với trình tự acid amin giống nhau cao bằng phần mềm Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), National Center for Biotechnolgy Information (NCBI). Gen Mae843ORF8180 của Microcystis aeruginosa được chọn lọc in silico là giả định mã hóa cho một enzym giới hạn R-M IIG vì thuộc danh sách của họ enzym giống HauI. Kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi thiết kế từ hai đầu trình tự 3’ và 5’ của gen Mae843ORF8180 được áp dụng để sàng lọc trực tiếp gen đích của toàn bộ ADN tách chiết từ một mẫu nước ao hồ màu xanh thu thập ở Cầu Diễn, kết quả cho phản ứngdương tính. Sản phẩm PCR được clon vào vectơ pSAPv6 và biểu hiện protein ở vi khuẩn Escherischia coli. Protein tái tổ hợp thu được có hoạt tính của enzym giới hạn, có khả năng nhận biệt trình tự đặc hiệu mới 5’GCAAAAG 3’.