Tạo kít Elisa phát hiện bệnh do sán lá gan lớn (Fasciola hepatica/gigantica) dựa trên protein Saposin-like 2 tái tổ hợp

Tạo kít Elisa phát hiện bệnh do sán lá gan lớn (Fasciola hepatica/gigantica) dựa trên protein Saposin-like 2 tái tổ hợp
Development of recombinant Saposin-like 2 protein based Elisa for human serodiagnosis of Fasciola (Fasciola hepatica/gigantica)
Tác giả: Phạm Trần Đăng Thức, Tăng Tuyết Huệ, Trần Quốc Vũ, Trần Quốc Thiên, Huỳnh Hồng Quang, Hồ Văn Hoàng, Đào Trịnh Khánh Ly, Hồ Đắc Thoàn, Nguyễn Văn Chương, Hồ Huỳnh Thùy Dương
Tóm tắt:
Việt Nam là một trong những quốc gia có bệnh nhiễm sán lá gan lớn (Fasciola hepatica/gigantica) lưu hành toàn quốc. Việc chẩn đoán nhiễm sán lá gan lớn gặp nhiều khó khăn do dễ nhầm lẫn với các loại kí sinh trùng hoặc các tác nhân gây tổn thương gan khác. Phương pháp ELISA dựa trên kháng nguyên tái tổ hợp được đề xuất như một biện pháp hỗ trợ và có ý nghĩa trong chẩn đoán thường quy. Trong công trình này, bằng phương pháp tạo dòng biểu hiện, chúng tôi đã tạo được lượng lớn protein Saposin-like 2 (Sap-2) tái tổ hợp đặc trưng cho sán lá gan lớn. Từ nguồn kháng nguyên này chúng tôi đã xây dựng kit ELISA phát hiện kháng thể đặc trưng tình trạng nhiễm sán lá gan trong huyết thanh người, với các thông số: nồng độ kháng nguyên phủ giếng 2,5 μg/ml, độ pha loãng huyết thanh 1/200, ngưỡng phát hiện 0,2, thời gian ủ huyết thanh, kháng thể thứ cấp và cơ chất lần lượt là 30, 15 và 5 phút. Kết quả so sánh với hai kit thương mại trên 96 mẫu dương và 57 mẫu âm cho thấy kit ELISA tạo ra có độ tương đồng cao 94%, độ nhạy 91%, độ đặc hiệu 98% và không nhiễm chéo với một số mẫu nhiễm ký sinh trùng khác. Do đó bộ kit có tiềm năng trong chẩn đoán nhiễm sán lá gan lớn ở người.