Ứng dụng phương pháp RT-PCR để nhận dạng vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A

Ứng dụng phương pháp RT-PCR để nhận dạng vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A
Application of RT-PCR method for identification of Hepatitis A virus in Hepatitis A vaccine
Tác giả: Lưu Thị Dung, Đoàn Hữu Thiển, Nguyễn Thị Lý, Nguyễn Thị Hồng Định, Phạm Văn Hùng
Tóm tắt:
Nghiên cứu ứng dụng phương pháp RT-PCR (Reverse transcription – Polymerase Chain Reaction) để xác định sự có mặt của vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A nhằm xây dựng một quy trình nhận dạng chung cho các loại vắc xin viêm gan A. Các vắc xin viêm gan A được lựa chọn để tiến hành thử nghiệm gồm: 2 loại vắc xin nhập khẩu là Avaxim, Epaxal và vắc xin Havax được sản xuất trong nước. Kết quả cho thấy: Các chủng vi rút viêm gan A được phát hiện có trong vắc xin bởi sản phẩm của phản ứng RT-PCR được tạo thành với cặp mồi đặc hiệu để khuếch đại đoạn gen C-VP3 kích thước 206 nucleotit. Trước khi tiến hành phản ứng RT-PCR, cần phải tiến hành loại bỏ nhôm và các thành phần tham gia phản ứng RT-PCR như sau: 5μl dung dịch đệm (master mix), 5 μl H2O, 1,25 μl dNTP, 1,25 μl mồi xuôi và mồi ngược, 1,25 μl enzyme, 5μl dung dịch Q , 5μl ARN khuôn và chu trình chạy: 50°C 30 phút, 95°C 15 phút, 94°C trong 1 phút, 48°C trong 1 phút, 72°C trong 2 phút, 72°C 10 phút, 40 chu kỳ.