Xây dựng quy trình xét nghiệm chẩn đoán phát hiện đồng thời EV71 và CA16 bằng kỹ thuật Multiplex RT-PCR

Xây dựng quy trình xét nghiệm chẩn đoán phát hiện đồng thời EV71 và CA16 bằng kỹ thuật Multiplex RT-PCR
Tác giả: Lê Thị Thảo Em, Nguyễn Thị Thanh Thảo, Vũ Thị Quế Hương, Nguyễn Thị Như Mai.
Tóm tắt:
Trên cơ sở tham khảo các trình tự vùng VP1 của các chủng EV71, CA16 chúng tôi tiến hành thiết kế các cặp mồi EV71F, EV71R đặc hiệu với EV71 và CA16F, CA16R đặc hiệu với CA16 để xây dựng quy trình mRT-PCR tối ưu hóa ở nhiệt độ lai 55,50C với tỷ lệ 2 cặp mồi EV71/CA16 là 1:1; phản ứng có giới hạn phát hiện là 102 copy; thời gian thực hiện phản ứng 6-8 giờ. Quy trình đã đáp ứng đầy đủ tiêu chí của Holger F. Rabenau (2007) về độ chuẩn xác, độ nhạy, độ đặc hiệu, độ chính xác khi lặp lại phản ứng nhiều lần trong cùng điều kiện và khác điều kiện. Và khi ứng dụng quy trình trên các mẫu bệnh phẩm mắc bệnh TCM độ 2b tại Tiền Giang đã cho kết quả đáng tin cậy khi so sánh với quy trình chuẩn của Phòng Xét nghiệm vi rút đường ruột, Viện Pasteur Tp. Hồ Chí Minh, đồng thời nhận thấy tác nhân chính gây cho trẻ mắc bệnh TCM là do EV71, không phát hiện CA16 trong các mẫu bệnh phẩm lâm sàng đã thu thập