Áp dụng dung dịch ly giải tế bào (TpLR) trong tách chiết nhanh ARN trên nuôi cấy tế bào

Áp dụng dung dịch ly giải tế bào (TpLR) trong tách chiết nhanh ARN trên nuôi cấy tế bào
Application of a rapid lysis buffer (TpLR) for rapid RNA extraction from cell culture
Tác giả: Nguyễn Thị Thường, Nguyễn Đăng Hiền, Nguyễn Trần Hiển, Trần Thị Hiền, Phạm Thị Bích Ngọc, Thẩm Chí Dũng
Tóm tắt:
ARN có chất lượng là yếu tố đầu tiên và quan trọng nhất ảnh hưởng đến RT-PCR nên rất cần nỗ lực để đơn giản hóa và tăng cường chất lượng tách chiết. Dung dịch ly giải nhanh tế bào (TpLR) đã được sử dụng thành công trong tách chiết ADN, xây dựng các phương pháp mới trong chẩn đoán, nghiên cứu, và sản xuất. Nghiên cứu này xác định đầy đủ hơn sự tương quan và tính bền vững của ARN tách chiết bằng TpLR và sinh phẩm thương mại sau khi gây nhiễm vắc-xin sởi trên tế bào Vero ở nồng độ đặc và pha loãng hàng loạt bậc mười từ 10-1 đến 10-4 và định lượng RNA bên trong tế bào sau 72 giờ gây nhiễm với các điều kiện bảo quản theo nhiệt độ và thời gian thực (17 tháng ở -80oC và -30oC). Kết quả cho thấy tách chiết ARN bằng TpLR và sinh phẩm thương mại cho kết quả tương đương với R2 của giá trị chu kỳ ngưỡng (Ct) từng cặp dao động từ 0,92-1,0 sau gây nhiễm 24, 48, và 72 giờ. Hiệu giá tuyệt đối ARN không khác biệt sau 12 và 15 tháng ở -80oC, và 2 tháng bảo quản tiếp ở -30oC. Có thể sử dụng TpLR để tách chiết ARN trên nuôi cấy tế bào với ưu điểm đáng kể về thời gian, kinh phí và hiệu suất thực hiện.