Thẩm định và ứng dụng phương pháp Realtime PCR trong sàng lọc và chẩn đoán sớm Leptospira trên các loại mẫu bệnh phẩm

Thẩm định và ứng dụng phương pháp Realtime PCR trong sàng lọc và chẩn đoán sớm Leptospira trên các loại mẫu bệnh phẩm
Verification and application realtime PCR assay for screening and diagnostic Leptospira from infectious samples
Tác giả: Hoàng Kim Loan, Đinh Thị Ngọc Anh, Lạc Ngọc Thêm, Nguyễn Viết Chánh, Phùng Lê Trâm, Nguyễn Minh Châu, Lê Thanh Tùng, Phạm Công Trung, Vũ Thị Quế Hương
Tóm tắt:
Chúng tôi đã tiến hành xác nhận giá trị sử dụng và ứng dụng kỹ thuật realtime PCR để phát hiện nhanh Leptospira spp. bằng gen đích rrs(16S) trên một các loại mẫu bệnh phẩm gồm huyết thanh bệnh nhân và mô thận động vật gặm nhấm. Kết quả cho thấy, độ đặc hiệu của phản ứng là 100%, chỉ có tín hiệu khuếch đại trên chủng Leptospira gây bệnh, không có tín hiệu khuếch đại ADN trên chủng Leptospira không gây bệnh,, giới hạn phát hiện là 70 fg trên 1 phản ứng, hiệu quả khuếch đại R2 trong khoảng 99,3% – 99,9%. Kết quả ứng dụng phương pháp này đã phát hiện được 1/20 mẫu huyết thanh bệnh nhân và 10/30 mẫu mô động vật gặm nhấm có tín hiệu khuếch đại Leptospira. Kết quả trên được kiểm tra lại bằng kỹ thuật PCR truyền thống và đã xác định được 10 mẫu dương tính trong tổng số 11 mẫu có tín hiệu khuếch đại với realtime PCR. Kỹ thuật realtime PCR trên gen rrs (16S) hoàn toàn có thể áp dụng trong sàng lọc và chẩn đoán nhanh Leptospira từ mẫu huyết thanh người và mô thận động vật gặm nhấm tại phòng thí nghiệm. Từ khóa: Realtime PCR, Leptospira, Việt Nam