Tiền thẩm định phương pháp xác định cộng hiệu vắc xin sởi bằng định lượng ARN bên trong tế bào gây nhiễm

Tiền thẩm định phương pháp xác định cộng hiệu vắc xin sởi bằng định lượng ARN bên trong tế bào gây nhiễm
Tác giả: Nguyễn Thị Thường, Nguyễn Đăng Hiền, Phạm Thị Bích Ngọc, Trần Thị Hiền, Nguyễn Trần Hiển
Tóm tắt:
Tiền thẩm định phương pháp là bước bắt buộc của quá trình thẩm định phương pháp nhằm khẳng định một phương pháp mới có thể được áp dụng một cách thường quy. Nghiên cứu này tiền thẩm định phương pháp xác định nhanh công hiệu vắc xin sởi bằng định lượng ARN bên trong tế bào sau 24 giờ gây nhiễm tế bào Vero vắc xin pha loãng 10-1 so với phương pháp tạo đám hoại tử. Phương pháp mới được tiền thẩm định đầy đủ trên 10 loạt vắc xin chọn và tiện lợi (POLYVAC, 2010-2013) với tiêu chí độ đúng, độ chính xác, độ tương quan tuyến tính, giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng, tính đặc hiệu và tính lựa chọn, và độ mạnh. Chất lượng thử nghiệm được kiểm soát bằng vắc xin mẫu chuẩn, chứng tế bào, chứng âm và gam chuẩn. Mỗi liều 0,5ml vắc xin mẫu chuẩn có 4,0-4,1 log10 đơn vị tạo đám hoại tử (Plaque Forming Unit – PFU), thấp hơn của nhà sản xuất (4,2-4,7 log10). Hệ số biến thiên (Coefficient of variation – CV) cùng một lần thử nghiệm và độ lặp lại trung gian của gam chuẩn tương ứng là 0,8% và 3,3%. Hệ số tương quan (R) giữa PFU và ARN là 0,80; hiệu giá ARN (7,67-8,08 log10) cao hơn PFU 3,1×103 lần. Biểu đồ Levey-Jennings hiệu giá PFU và ARN rất tương đồng, khác biệt giữa các loạt <0,41log10 và ổn định trong khoảng 2 độ lệch chuẩn (±2SD). Giới hạn phát hiện và định lượng tương ứng là 10-1- 1012 và 101-106 bản sao ARN/5μl khuôn mẫu. Chứng âm và chứng tế bào luôn âm tính. CV của 2 ngày thử nghiệm khi có thay đổi không thể tránh khỏi là 2,7%. Kỹ thuật mới chính xác với giới hạn định lượng 101-106 bản sao ARN, có độ đặc hiệu, tính chọn lọc, độ mạnh cao, ổn định và hiệu giá ARN tương quan chặt chẽ với PFU