Phát triển phản ứng multiplex PCR chứa chứng nội tại tái tổ hợp xác định đồng thời vi khuẩn Bacillus anthracis và Yersinia pestis

Phát triển phản ứng multiplex PCR chứa chứng nội tại tái tổ hợp xác định đồng thời vi khuẩn Bacillus anthracis và Yersinia pestis
Tác giả: Đinh Thị Thu Hằng, Nguyễn Thái Sơn, Nghiêm Ngọc Minh
Tóm tắt:
Nghiên cứu phát triển các kỹ thuật dựa trên PCR xác định nhanh, chính xác tác nhân khủng bố sinh học, đặc biệt là Bacillus anthracis và Yersinia pestis đang được quan tâm hiện nay. Công trình này đã phát triển một phản ứng PCR đa mồi chứa chứng nội tại tái tổ hợp xác định đồng thời B. anthracis và Y. pestis gây bệnh trong tự nhiên. Nghiên cứu thực hiện trên tám chủng B. anthracis Ba1-Ba8, một chủng Y. pestis Yp1 lưu giữ tại Học viện Quân y được bất hoạt 121°C/20 phút trước khi tách chiết ADN. Chứng nội tại plasmid pJET1.2-capA-IC1 (thiết kế sử dụng chung cặp mồi chẩn đoán capAF1/R1 phát hiện B.anthracis) được bổ sung vào mẫu trong quá trình tách chiết để xác minh kết quả chẩn đoán, loại bỏ hiện tượng âm tính giả. Thực hiện tối ưu nồng độ chứng nội tại và các thành phần trong phản ứng PCR đa mồi (cặp mồi vrrAF1/R1, pagAF1/R1, capAF1/R1 cho B. anthracis và ypo2088F1/R1, plaF1/R1, caf1F1/R1 cho Y. pestis). Nồng độ chứng nội tại tối ưu được xác định là 5×104 copies/phản ứng. Đây là nghiên cứu mới về một phản ứng PCR đa mồi chứa chứng nội tại chẩn đoán chính xác, đồng thời B. anthracis, Y. pestis gây bệnh ở Việt Nam, đáp ứng yêu cầu về an ninh quốc phòng và phòng chống dịch bệnh.