Thiết lập bộ mẫu chuẩn HBV-DNA trong kiểm định các xét nghiệm axit nucleic của vi rút viêm gan B

Thiết lập bộ mẫu chuẩn HBV-DNA trong kiểm định các xét nghiệm axit nucleic của vi rút viêm gan B
Establishment of an in-house HBV-DNA standard for validation of nucleic acid testing of Hepatitis B virus
Tác giả: Hoàng Xuân Sử, Lê Thị Bảo Quyên, Đinh Thị Thu Hằng
Tóm tắt:
Các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA có vai trò rất quan trọng trong việc phát triển và đánh giá các xét nghiệm axit nucleic của virus viêm gan B bao gồm cả định lượng và định tính. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thiết lập 2 bộ mẫu chuẩn HBV-DNA nội bộ theo con đường tái tổ hợp. Trình tự gen S đặc hiệu của vi rút viêm gan B (Hepatitis B virus – HBV) kiểu gen B và C được tạo dòng tạo các thể plasmid chứa gen đích. Các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA được thiết lập bằng cách pha loãng plasmid từ nồng độ gốc theo hệ số 10 trong nước khử ion, đường chuẩn định lượng được xây dựng, đánh giá các bộ mẫu chuẩn bằng kỹ thuật realtime PCR về độ chính xác, độ ổn định theo thời gian; sử dụng trong định lượng HBV-DNA trên 30 mẫu huyết tương bệnh nhân viêm gan B mạn tính và 30 mẫu huyết tương người khỏe mạnh (HBsAg(-)). Các bộ mẫu chuẩn với dải nồng độ từ 101-109 copies/phản ứng, đường chuẩn tuyến tính với hệ số xác định R2 =0.9981, hiệu quả khuếch đại cao (E=94%). Khi đánh giá trên mẫu lâm sàng, định lượng HBV-DNA bằng bộ mẫu chuẩn nghiên cứu tương đương kit thương mại RealStar® HBV PCR 1.0 (Altona Diagnostics, Đức) khi phân tích bằng phương trình hồi quy tuyến tính và biểu đồ Bland-Altman. Bộ mẫu chuẩn có độ chính xác cao (hệ số biến thiên thấp), độ ổn định trên 6 tháng. Như vậy, bước đầu đã thiết lập thành công các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA của 2 kiểu gen B và C, làm tiền đề cho phát triển và kiểm định kit chẩn đoán axit nucleic của HBV ở Việt Nam